Hvernig á að nota genbyssu

1. Efnablöndur

Þunnt lag af miðli var sett á 9 cm2 ræktunarfat og efni (venjulega óþroskað fósturvísi, þroskað fósturvísa, lítið kallus, fjölsetra frumur, protoplasts osfrv.) Var þétt í miðju fatsins með þvermál 3 cm .

2, meðferð gull duft

Taktu 60 mg gúmmíduft eða wolframduft í centrifugatlasi, bætið við 1 ml algeran etanól, hristið vel í 3 mínútur, skiljið í 1 á 9615 g, fjarlægið flotið, bætið 1 ml af sæfðu vatni og blandið vel, skilið við 9615 g, endurtakið þrep 3 hér að framan. Times. Að lokum var gúmmíduftið látið standa í 1 ml af sæfðu, eimuðu vatni og geymd við 4 ° C eða við stofuhita.

3, DNA vinnsla

Taktu 50tA gullduftdreifingu, bætið 5rd plasmíð DNA (1,0 / lg ~ 1) lausn, 50 / l

0,1 mól / l spermidín (lausnin sem notuð var dauðhreinsuð), hrist í 3 mínútur, eftir við stofuhita í 10 mínútur, skilvinduð við 9615 g í 10 s, fargaðu flotið; bæta við 250 ~ 1 hreinu etanóli, hrist við Centrifuge við 9615 g í 10 s og fleygðu ofninum. Pilla var resuspended í 60/1 1 af hreinu etanóli og notað til 5 skot (10 til 1 á skot).

4, aðgerð gena byssuna

Allar aðgerðir genavarnarinnar eru gerðar við smitgát, eins og hér segir:

1) Sótthreinsaðu yfirborð genavarnarins og sýnishólfið með 70% etanóli. Á sama tíma var hindrunarnetið og klofinn diskur, ör-teygjanlegt flytjandi, handhafi og festibúnaður látinn liggja í bleyti í 15 mínútur með 70% etanóli og síðan settur á hreina bekkur til að þorna. The splittable þind, fastur kápa og ör-teygjanlegt byrjunarbúnaðinn er hægt að yfirborðsmeðhreinsa með 70% etanóli og blásið þurrt.

2) Setjið örhlífin í gluggahlerann og bætið blöndu af DNA og gulldufti við miðju örhlutaglinsins og þurrkið í um það bil 1 mínútu.

3) Settu upp brjótandi himnu á handhafa og snúðu henni réttsælis á gaseldsneytið.

4) Setjið geimhringinn, sljór netið, sljór nethirðinn, agnapípuna og festingarhringurinn (andlitið með agnunum snúið niður), herðið hlífina og settu hana í grípuna.

5) Settu sýnið í sprengihólfinu og lokaðu dyrunum.

6) Opnið aðalventil heliumhylkisins og snúið helíumstýrisventilsins réttsælis þannig að vísbendingin um þrýstingsmælispjaldið sé hærri en þindþrýstingurinn 200Psi (= 1,379MPa).

7) Kveiktu á byssuna og byssuna.

8) Ýttu á tómarúmshnappinn. Þegar tómarúmið er 26-28in Hg (= 88,05 ~ 94,82kPa) skaltu ýta á halt hnappinn hratt og halda því á hnappinn og haltu honum inni þar til hann er virkur.

9) Ýttu á vent-takkann til að endurstilla sýnið eftir að búnaðurinn hefur verið núllstilltur.

10) Leggja niður.

Festðu aðalrofann á helíumhólkinum, sláðu á tómt byssu, snúðu bendlinum þrýstingsmælisins í núll, snúðu síðan þrýstingsmælisstillingarlokanum rangsælis; slökktu á aðalrofanum á byssunni og spennirrofanum.