Hver eru mismunandi leiðir til að flytja erlent DNA í bakteríurnar?
Nov 05, 2019
Skildu eftir skilaboð
Til að flytja erlent DNA í hýsilfrumuna eru ýmsar aðferðir útfærðar. Það eru tveir breiðir flokkar genaflutnings sem eiga sér stað náttúrulega eða tilbúnar með truflunum manna.
Lárétt genaflutningur : Það er hægt að skilgreina það sem flytja efni frá einni frumu til annarrar frumunnar en foreldri til dótturfrumu.
Lóðrétt genaflutningur: Í þessu er genaflutningurinn milli foreldrafrumunnar og dótturfrumunnar.
HGT [1] felur í sér umbreytingu, transfection og samtengingu.
Umbreyting : Við þekkjum alveg tilraun Griffith og umbreytingarreglu hans. Það er hægt að skilgreina það sem upptöku ef nakið DNA og samþætting þess í bakteríakerfinu. Umbreyting sést náttúrulega í plöntum, dýrum og bakteríum. Umbreytingu er hægt að gera með tilbúnu útfærslu á sértækum aðferðum eins og rafmögnun, ballistic aðferð, efnafræðilegum aðferðum o.s.frv.
Transfection [2] : Það er svipað og umbreyting. Fyrir heilkjörnungafrumur er umbreytingarorð notað til að tengjast krabbameini og þannig er transfection orð tekið upp. Aðlögun ferli felur í sér vírusinn sem miðil til að flytja erfðaefnið í heilkjörnungakerfið.
Samtenging : Það er náttúrulega ferli hjá bakteríum og öðrum fræðiritum sem auðveldar kynferðislega æxlun. Samtenging á sér stað með því að mynda samtengingarbrúna sem gerir klefanum fyrir gjafa (karl) kleift að flytja erfðaefnið til viðtakandi frumunnar (kvenkyns). Samtengingarbrúin er mynduð af grindinni (kölluð kynpíli) bakteríanna tveggja. Athugið: bakteríufílar eins og M13 nota þessar grísir til að flytja erfðaefni þeirra beint í bakteríugrindina.
Aðferðir við umbreytingu sem notaðar eru af erfðaverkfræðingum og líftækni til að umbreyta frumurnar eru í stórum dráttum flokkaðar í tvo flokka: Eðlis- og efnafræðilegar aðferðir.
1) Efnafræðilegar aðferðir:
CaCl2 meðferð: CaCl2 myndi óstöðugleika frumuhimnuna. Það myndi bindast DNA og hylja neikvæða hleðslu fosfats. Þess vegna getur DNA auðveldlega farið inn í frumuna í gegnum blóðfituálagið. CaCl2 veldur því að DNA fellur út á ytri fasa fituhimnunnar. Ef sýnið er hitað (42 ° C) fyrir sýnið eykur það afrakstur spennenda.
PEG meðferð: Fyrir plöntufrumur notum við PEG í stað CaCl2. PEG er 4000 Da sameindir og það óstöðugar himnuna og myndar fléttu með DNA. DNA er síðan auðveldlega flutt inn í frumuna.
Aðrar efnafræðilegar aðferðir fela í sér notkun DEAE dextrans, fitukorn, nanocarriers o.s.frv.
2) Líkamlegar aðferðir:
Elroproporation: Það felur í sér notkun rafpúls til að mynda tímabundin svitahola í himnunni. Auðveldlega er hægt að fella litlu plasmíðin og DNA með því að nota efnafræðilegar aðferðir, en fyrir stóru DNA sameindirnar verðum við að nota eðlisfræðilegar aðferðir. Samt sem áður, við raforkuvinnslu ætti styrkur að vera mikill. Ef um er að ræða plöntufrumur er fruman umkringd lögunum af fjölsykrum og öðrum lífmoleklum eins og hemicellulose, sellulósa, pektíni o.fl. protoplast. Þannig er hægt að mynda svitahola í himnunni og hægt er að flytja DNA inn í frumuna með rafræktun.
 |
 |
Líffræðileg aðferð [4] : Það er einnig kölluð agna sprengjuaðferð, agna byssu aðferð, eða einfaldlega gen byssu. Hljóðfærið samanstendur af örberum sem samanstanda af þungmálmum eins og Au, Ag, W o.fl. . Þegar byssunni er skotið er þrýst á gasið í byssuna sem leiðir til þess að rofadiskurinn brotnar. Platan með örberanum (með DNA) færist í átt að stöðvaplötunni. Örberinn myndi þá færa sig og fara inn í klefann. DNA er þannig beint flutt inn í frumuna. Hins vegar eru nokkrar takmarkanir á notkun genabyssu. Möguleiki er á að setja margar agnir og uppsöfnun þess sem getur valdið ofþjöppun á geninu eða genþögn.
 |
 |
http://www.scientzbio.com/gene-transduction-device/
Ör stungulyf : Þeir nota mjög fína pipettu til að sprauta DNA sameindirnar beint í kjarna frumunnar sem á að umbreyta. Það er notað fyrir plöntu- og dýrafrumur.
 |
Athugasemd: Ég þakka leiðréttingar þínar og tillögur ef gögnin skipta ekki máli.
Tilvísun og frekari upplestur
Brown, TA, 2016. Genklónun og DNA greining: kynning. John Wiley & Sons.
Wolff, JA, Malone, RW, Williams, P., Chong, W., Acsadi, G., Jani, A. og Felgner, PL, 1990. Bein genaflutning í músarvöðva in vivo. Vísindi, 247 (4949 bls. 1), bls.1465-1468.
Lorenz, MG og Wackernagel, W., 1994. Genabreyting baktería með náttúrulegum erfðabreytingum í umhverfinu. Örverufræðilegar umsagnir, 58 (3), bls.563-602.
Lurquin, PF, 1997. Genaflutningur með electroporati